植物細(xì)胞組織培養(yǎng)

    一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

    植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的技術(shù)性強(qiáng)，要求無(wú)菌操作，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可初步掌握常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù)，加深對(duì)無(wú)菌操作的了解。

    二.實(shí)驗(yàn)原理

    植物的性：植物體的任何一個(gè)細(xì)胞都具有生長(zhǎng)分化成為一個(gè)完整植株的能力，稱為植物的性。

    植物組織培養(yǎng)就是利用植物的性進(jìn)行離體無(wú)菌植物培養(yǎng)的一門(mén)技術(shù)。植物組織培養(yǎng)按其原始意義，就是指愈傷組織培養(yǎng)。但發(fā)展至今，其范圍日益擴(kuò)大，已包括植物和它的離體器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。因此，擁有幾種不同水平的培養(yǎng)技術(shù)，即整體的、器官的、組織的、細(xì)胞的和原生質(zhì)的培養(yǎng)技術(shù)。

    本實(shí)驗(yàn)選擇豌豆為材料，豌豆（Pisumsativum）屬豆科植物，是糧食、飼料和重要的蔬菜作物，也是遺傳學(xué)家和植物生理學(xué)家感興趣和樂(lè)于采用的實(shí)驗(yàn)植物，豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體，皆可形成愈傷組織，其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養(yǎng)可包括小至十幾微米的莖尖分生組織（生長(zhǎng)點(diǎn)）和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養(yǎng)。在實(shí)踐應(yīng)用上，常采用生長(zhǎng)點(diǎn)的培養(yǎng)使患病植物去病毒，以達(dá)到挽救優(yōu)良品種，提高產(chǎn)量和質(zhì)量之目的。

    三．實(shí)驗(yàn)材料

    儀器設(shè)備：1．酒精燈、三角燒瓶，培養(yǎng)皿；2．鑷子、剪刀、剖針；3．雙筒解剖顯微鏡；4．光照培養(yǎng)箱或溫室；

    材料煙草無(wú)菌苗、豌豆幼苗。

    試劑

    （1）MS培養(yǎng)基，植物激素：NAA、6-BA等；

    （2）飽和漂液（次氯酸鈉）；

    （3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

    （4）無(wú)菌水

    四．實(shí)驗(yàn)步驟

    豌豆苗的莖尖培養(yǎng)

    ⑴取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡(jiǎn)取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無(wú)菌）用無(wú)菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養(yǎng)皿中。

    ⑵在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝?nèi)ビ兹~露出生長(zhǎng)錐，用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個(gè)葉原基的生長(zhǎng)錐。

    ⑶將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤（6-BA）的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織形成，用封口膜將培養(yǎng)皿封好。在恒溫培養(yǎng)箱中，26℃下,培養(yǎng)六周，形成愈傷組織，經(jīng)繼代后，可用于生根培養(yǎng)