ELISA試劑盒綜合問題解答（三）

在做ELISA試劑盒實驗過程中，難免會遇到各種不同的問題，下面是小編整理的實驗條件選用：

如何選擇合適的陽性對照？ 
陽性對照的基本組成應該盡量與檢測樣本的組成一致,一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質(zhì),加入一定量的待檢物質(zhì).比如,以人血清為標本的測定,陽性對照多用確定的病人血清或者以復鈣人血漿為原料加入一定量標準品. 

如何選擇合適的陰性對照？ 
陰性對照的基本組成也應該盡量與檢測樣本的組成一致,先行檢測確定其中不含待檢物質(zhì).比如,檢測人血清標本時,陰性對照應該選擇正常人血清;檢測免疫動物血清中抗體效價時,陰性對照應該選擇該動物的免疫前血清.

如何正確使用酶結(jié)合物？ 
1.酶結(jié)合物的稀釋液 
在稀釋液中常加入高濃度的無關蛋白質(zhì)(例如1%BSA或5%脫脂奶粉),通過競爭抑制酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附.一般還加入能夠抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜). 

2.正確稀釋酶結(jié)合物 
酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定,濃度過高易導致本底偏高,濃度過低則會導致陽性信號的減弱. 
酶結(jié)合物在使用前稀釋,稀釋后的酶結(jié)合物不宜長期保存,因為低濃度的酶結(jié)合物極易失活.

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